HPLC方法開發(fā)緩沖鹽的選擇

水相流動相的使用，是采用反相色譜法進(jìn)行離子化合物分析檢測的關(guān)鍵步驟：包括pH值對分析物保留的影響、緩沖鹽的類型與濃度、緩沖鹽在有機溶劑中的溶解度及其對檢測的影響等。緩沖鹽種類、離子強度和pH值等選擇不當(dāng)，會導(dǎo)致對極性化合物和可電離化合物進(jìn)行反相分離時，存在不良或不可重現(xiàn)的保留和拖尾現(xiàn)象。

分析物部分離子化，分析物與固定相自由硅醇基和其他活性位點之間較強的作用力等問題，可通過選擇合適的緩沖范圍、正確的緩沖鹽種類及其濃度（離子強度）來改善。靈敏的LC-MS分析，更加注重酸、堿、緩沖鹽種類和其他添加劑的選擇：緩沖液不能抑制分析物的電離。

反相模式中，離子化合物的保留主要由流動相pH值來決定。離子官能團的解離性能同樣影響化合物的保留。非離子化合物的保留幾乎不受流動相pH值的影響。對于含酸性基團的化合物（羧酸鹽居多），pH值低于化合物pKa可增強保留，對于含堿性基團的化合物（胺類居多），pH值高于化合物pKa可增強保留。

在pH值離pka較遠(yuǎn)的位置，較小的pH值變化對非質(zhì)子-質(zhì)子種類的比例影響很小。因此，中等pH值變化不會對保留產(chǎn)生明顯影響。pKa附近pH值的微小變化，會對兩種物質(zhì)的比例產(chǎn)生明顯的影響。因此，改變接近pKa的pH值，會明顯影響化合物的保留。當(dāng)pH值作為增加化合物保留的手段時，考慮方向應(yīng)該是盡量降低分析物的離子化。緩沖液是弱酸與其共軛堿，或弱堿與其共軛酸的溶液。

緩沖液降低氫離子、水合氫離子和氫氧根離子的影響，從而較少包括稀釋在內(nèi)的pH值波動。反相模式下，經(jīng)典的硅膠基質(zhì)填料的pH值耐受范圍是2-8。緩沖液的選擇通常由所需的pH值決定。緩沖液的pKa必須接近所需的pH值，因其在pKa處最容易控制pH值。經(jīng)驗法則是選擇一個pKa值<2個單位的所需流動相pH的緩沖液。

緩沖鹽應(yīng)用一般思路