藥品中基因毒性雜質的痕量分析，非得用MS嗎？

目前對于藥品中含有的極少量物質（如基因毒性雜質等），在對其進行痕量分析時，通常采用的檢測手段是：利用先進的液質聯用（如LC-MS或LC-MS/MS等）、氣質聯用（如GC-MS或GC-MS/MS等）設備，對其微量物質進行檢測時所需液相色譜系統可能為更高級的超高效液相色譜儀。

如檢測藥物中含有亞硝胺類基因毒性雜質NDMA，根據不同原料藥的性質不同，目前國際上公布的方法主要有：GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，HPLC-UV法（EDQM公布）。國內官fang公布的方法主要有GC-MS法、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法，如中國藥典2015年版二部推薦使用GC-MS法（詳見《纈沙坦》原料中N-ya硝基二甲胺的含量測定方法），不推薦使用HPLC-UV法，因為HPLC-UV法靈敏度比質譜儀的靈敏度差很多，而且專屬性差些，容易受到檢測干擾，故HPLC-UV法具有很大的局限性，只能準確測定那些含量相對較高的物質。

然而現有檢測技術中：

● 質譜儀價格昂貴，運行成本高，所需的試劑要求高，抗干擾能力差，維護保養費用很高，同時對質譜儀操作人員的水平要求非常高，需要高層次的人才方能準確操控。故質譜儀普及率非常低，一般企業較少購置，對于需要使用質譜儀進行痕量分析時只能委托特定的機構使用質譜儀進行檢測。

● 氣相色譜/質譜法操作過程繁瑣，經過前處理后樣品損失嚴重。

● 高效液相色譜儀價格便宜，操作容易，覆蓋面廣，一般企業均很常見。但是單純使用HPLC-UV法進行檢測含量極少的物質時，其靈敏度差，不能準確定量檢測出復雜原料藥中含量極低的物質，且檢測過程中目標化合物所受干擾亦較大，目標化合物與其它雜峰之間的分離難度較大。

基于以上痕量檢測的難點，沒有質譜儀的幫助，實驗人員是否可以通過長期大量的研究，不斷嘗試各項色譜條件的調試，諸如：流動相試劑的組成、梯度程序設置、柱溫、流速的改變等。

特別是色譜柱的篩選，如雖然同樣都是十八烷基硅烷鍵合色譜柱，可以嘗試不同品牌、不同系列的C18柱，色譜柱間填料的差異會呈現出對樣品的不同選擇性。另外，色譜柱規格的差異也會帶來不同的檢測效果，如色譜柱的內徑越細靈敏度越高、色譜柱越長柱效越高、填料的粒徑越小分離效率越高……光是色譜柱就有多達7項以上的可調節參數。

最近就有一家藥企嘗試走了這樣一條路，對尼扎替丁中所含痕量雜質N-ya硝基二甲胺（NDMA）檢測方法進行了長期研究，最終探索出一種采用HPLC法測定樣品中NDMA的方法，該方法簡便快速，且測定結果準確。

這就是湖南威特制藥股份有限公司。在他們的開發報告中記錄到：

“我們首先嘗試解決了色譜分離的問題，因供試品溶液濃度很大，其他峰對目標物質NDMA的干擾較多，在摸索優化檢測方法的過程中，對色譜柱的選擇做了大量的工作，既要不被干擾，又要保證峰形正常，且需能夠增加該峰的檢出能力，最后選擇了特定的月旭Ultimate^® ODS-3  4.0×250mm，3μm色譜柱，且此型號的色譜柱批間差異較小。保證了該方法成功通過了方法學驗證，并最終獲得了發明專li授權。”

湖南威特測試了來自至少4個色譜柱廠家的十幾種C18柱，最終月旭Ultimate^® ODS-3 4.0×250mm，3μm這款柱子展現了其du特的分離和檢測特性，4.0mm內徑具有更高的靈敏度，3μm粒徑也提供了更高的柱效。在這款色譜柱的基礎上，客戶繼續配合優化其他的色譜條件，最終確定了這個簡便快捷，且測定結果準確的HPLC方法。

艱辛的付出，終于獲得了回報。感謝湖南威特為我們示范了超高的液相方法開發水平，展示了不同色譜條件配合玩轉色譜柱，為方法開發帶來的無限可能！

參考文獻：

一種HPLC法檢測尼扎替丁中N-ya硝基二甲胺的方法

（專li號：ZL202110045224.4；授權公告日：2023.07.28）